FuGENE
刘耀文的大沙雕
钟意阿满
请教使用FuGENE-HD转染细胞的经验
FUGENE是个独立的公司，以前是罗氏全球代理，现在改由promega代理销售。
两个公司销售的fugene是同一东西 但现在罗氏有自己的X-treme HP 不在销售fugene。
HD是fugene6 的升级版。
转染效率更高，适应性更广
抱起亚轩找小葵
影响质粒转染效率的因素有哪些?
个不是绝对的。
如果实验条件固定，一小时就可以做240个样本了。算15秒一个的话，样本浓度满足条件，样本染色处理的时间不算在内。几秒钟就可以记录一个样本。加上自动加样机。
当然，根据样本的浓度和所要求记录的量而定。
大圣杰锅是
是否可以将目的基因（无运载体）直接导入细胞中？细胞不会产生排斥分解掉外源DNA嘛？
1、质粒大小和转染量：在一般情况下，随插入片段长度的增加转染效率降低；而转染效率在一定的范围内与质粒转染量呈正相关。
2、DNA质量：高质量的DNA对于转染的效率至关重要。如果质粒不纯会显著影响转染复合物的形成，进而影响转染效率。因此，可以选择提取纯度较高的试剂盒对DNA进行提取和纯化，以得到更高质量的DNA，从而提高转染效率。
3、转染试剂的选择：转染试剂将外源核酸片段导入细胞，影响内源基因表达水平。在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂，例如在绵羊成纤维细胞转染过程中FuGene HD的转染效率更高，GenEscortTM I对小鼠胶质细胞则具有更好的转染效果。总之，可以遵循高效、低毒等原则进行选择。
4、质粒与转染试剂比例：在一定范围内，转染效率与质粒/转染试剂比值成正相关，但毒性也会增加。可以根据转染试剂推荐比例确定合适的合适的转染比例。
5、细胞状态：维持细胞生长及健康旺盛是提高转染效率的重要条件。建议选择对数生长期的细胞为佳，此时期的细胞生长旺盛，可能得到更高的转染效率，切勿选择传代次数过多，基因型可能发生改变的细胞。
6、细胞密度：细胞密度过高或过低都会影响转染效果，过高则难以转染，过低则容易导致细胞死亡，因此需要选择合适的细胞融合密度进行转染，一般来说细胞密度在60%-80%时转染较为理想，但具体密度可参考转染试剂的说明书进行操作。
7、血清：血清中含有大量的蛋白质，可能会降低转染效率。一般的转染试剂会要求转染时使用无血清培养基进行转染，转染完成后更换完全培养基。但现在有些新的转染试剂血清的存在已不造成威胁，甚至还有助于提高转染效率，如阳离子聚合物等。
8、抗生素：抗生素，如青霉素和链霉素，一般是作为培养基中的添加物来防止细胞污染。这些抗生素对于真核细胞没有毒性，但是转染时有些转染试剂增加了细胞的通透性使抗生素进入细胞，可能会间接导致细胞死亡，从而降低转染效率。可以根据转染试剂的要求来选择是否在培养基中添加抗生素。
质粒DNA细胞转染注意事项
线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。
如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分，使得DNA形成转染复合物时更致密一些，更容易转染一些。纯化质粒的质量也会影响转染效率，一定要选择高质量的质粒。
小韩在追星
哪位可以分享转染raw 264.7细胞经验？
当然可以，有各种试剂可以将目的基因导入细胞中（如Fugene， Lipofectamine）等等， 但是有些细胞系更容易成功（如HELA， CHO， HEK293）， 而另一些则较难（巨噬细胞）。这个过程叫转染。
细胞最终会将DNA分解掉， 这就是为什么一般转染后4天内表达消失。 如要长期表达则需要在载体DNA上另带一个抗药基因（G418）， 然后再用药来选择表达的细胞。
小韩在追星
牛成纤维细胞转染率为10%算高吗？
为了转染raw 264.7小鼠巨噬单核细胞我们实验室尝试了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它转染试剂，对于我们8000bp的质粒DNA基本转染后都没有荧光信号；师兄在中山大学的同学给我们推荐了他们实验室用Zeta Life Advanced DNA RNA货号AD600050转染raw 264.7细胞经验分享。
按照中山大学师兄给出的方法并结合我实验室情况我把自己在6孔板转染raw 264.7细胞的相关经验整理如下，希望对你转染raw 264.7细胞有一定的帮助，下面是我首次用转染raw 264.7细胞的荧光和细胞明场图片，后期进一步优化后的新图片我也会随后呈上：
一、质粒DNA准备
1、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素。
二、操作流程
1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。
2、复合物制备：将质粒DNA与Zeta Life Advanced Transfection Reagent AD600050转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。
3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。
4、转染24小时后对细胞进行正常换液。
5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率。
三、注意事项：
1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等转染试剂；
2细胞培养基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;。